細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響細(xì)胞存活率和活力，關(guān)系到后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗?zāi)芊癜凑沼媱澯行У剡M(jìn)行。掌握好細(xì)胞凍存的小Tips，有助您做好細(xì)胞培養(yǎng)式樣，讓我們一起來看看吧！

一、細(xì)胞凍存的基本原則

細(xì)胞凍存遵循“慢凍"原則：讓細(xì)胞在超低溫環(huán)境中緩慢進(jìn)入“冬眠"狀態(tài)，暫時停止其代謝活動。目的是保存細(xì)胞樣本，方便復(fù)蘇。

二、細(xì)胞凍存的注意事項

1. 溫度控制不穩(wěn)定可能導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低

二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護(hù)劑，保護(hù)細(xì)胞。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過程，同時增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。

2. 使用程序降溫盒的注意事項

（1）異丙醇的量必須足夠，且使用5次后需要更換，以確保凍存效果。而泡沫程序降溫盒需要在恢復(fù)到室溫后使用。對于短期的細(xì)胞凍存，可以考慮使用-80℃的超低溫冰箱。

（2）盡量選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存，此時的細(xì)胞匯合度應(yīng)達(dá)到80%以上。這樣可以大大提高細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率。對于嬌貴的細(xì)胞，我們可以通過適當(dāng)提高凍存液中血清的比例來保證獲得更高的存活率和細(xì)胞活力。

（3）細(xì)胞凍存密度不能太低，因為在細(xì)胞凍存時會損失部分細(xì)胞，所以適當(dāng)提高細(xì)胞密度有助于提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。

（4）細(xì)胞凍存液需要提前配制。在配制細(xì)胞凍存液時（或直接使用商業(yè)的細(xì)胞凍存液，如wako的無血清細(xì)胞凍存液302-14681），由于DMSO溶解在培養(yǎng)基中會釋放大量熱量，因此細(xì)胞凍存液需要提前配制，切忌直接將DMSO加入含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中，以避免損傷細(xì)胞。

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